Шевцов А. А. - Ветеринарная паразитология

Метод люминесцентной микроскопии (по В. Г. Эвра-новой) —новый метод диагностики гельминтозов. Он позволяет дифференцировать однотипные яйца разных видов гельминтов, а также отличать жизнеспособные яйца и личинки от мертвых. Предварительно яйца трематод, цестод и нематод обрабатывают растворами акридина оранжевого и другими флуорохромами. Жизнеспособные яйца и личинки нематод не люминесиируют или слабо лкь минесиируют. в то время как мертвые ярко светятся и окрашены в оранжевый, желто-зеленый или желтый цвет. При люминесцентной микроскопии можно дигЬФерен-цировать яйца главнейших пестод плотоядных, яйца возбудителей аскаридиоза и гетеракилоза KVP. имеющих, как известно, сходное строение по величине, Форме и окраске, а также различать жизнеспособные и мертвые ооцисты

Кокттидий.

П^рпяпаты просматривают под микроскопом МУФ-З или МЛ-2.

Методика люминесцентной МИКРОСКОПИИ сравнительно ПРОГТЯ и может быть испольчовяня в производственных УСЛОВИЯХ (ветеринапных лабораториях).

Из ДРУГИХ исследований, имеющих подсобное значение в установлении диагноза на гельминточьт. можно указать на такие, как выяснение морфологического состава КРОВИ' (учет эозинофилии), метод определения фракции белков.

Краткая характеристика яиц гельминтов

Яйпа паразитических червей надо дифференцировать от органических включений (спор, крахмальных зерен, грибов, пьтльтты растений и ДР.). яиц клетей и ДРУГИХ включений. Основные отличительные признаки яиц гельминтов: .СТРУКТУРНОСТЬ оболочек (чяпте сложного строения, нередко наличие крышечки, пробочек) и внутренняя органи^яния яйпа (зародыш на разных стадиях развития). Яйпа клетей в большинстве случаев значительно крупнее яиц гельминтов.

Размер яиц у папазитических , червей разных видов сильно колеблется. Например, самые крупные яйпа возбудителя нематодироза жвачных превышают по длине яйття возбудителей простогонимоча птиц в десять раз.

Чтобы отнести яйття ГРЛМ'ИНТОВ к определенным группам по величине, целесообразно исходить из следующих ориентировочных разделов их длины- очень крупные — от 0.1 К мм и ботьттте (Npmatorlirus spathisjer): кпупные — 0,1—0,14 мм (Fasciola hepatica); средние — 0,06—0,09 мм 58

(Ascaris suum); мелкие — 0.03—0,05 мм (Dicrocoelium laneeatum): очень мелкие — 0,02 и меньше (Prosthogoni-ITius ovatus) (цв. табл. Т—VI).

Яйца представителей разных классов различаются по величине, цвету, форме, строению оболочек и внутреннего содержимого.

Яйца трематод. Чаще овальной формы с крышечкой на одном полюсе. Оболочка гладкая. У некоторых видов оболочка снабжена филаментами (отростками), бугорками. Окраска яиц от светло-серой до коричневой (чаше желтая).

Яйца цестод. Бывают двух типов: лентетюв и цепней. У лентетюв они напоминают яйпа трематод (овальные с крышечкой). Яйпа цепней резко отличаются по строению от яиц гельминтов других классов: они чаще средней величины, округлой формы, серого цвета.-зрелые (внутри зародыш — онкосфера с тремя парами эмбриональных крючьев).

Яйца нематод. Отличаются от яиц трематод отсутствием крышечки; от яиц цестод — отсутствием онко-сферы.

Размеры, форма, строение и цвет ободочек яиц нематод очень разнообразны. Наружная оболочка бывает гладкой, бугристой, ячеистой; толшиня оболочек варьирует от тонкой (у стронгилят) до толстой (у трихоие-фал). У большинства нематод яйпа овальной формы, симметричные, у некоторых — полуцилиндрические (у драшей). Большинство нематод выделяют наружу незрелые яйца на предсегментационной стадии или нескольких шаров дробления, меньшинство — зрелые (внутри яйпа сформирована личинка).

Яйца скребней. Они имеют овальную, эллипсоидную и веретенообразную формы; размер их от среднего до крупного. Выделяемые во внешнюю среду яйца содержат внутри личинку — акантор с десятью эмбриональными крючьями (зрелые).

Клинические наблюдения

Клиническая картина гельминтозов сельскохозяйственных животных изучена слабо, а симптомокомплекс заболеваний, вызываемых паразитическими червями, довольно однообразен (угнетение, поносы, исхудание и др.); поэтому она играет подсобную роль при диагностике этой группы заболеваний. При ряде гельминтозов животных наблюдаются характерные симптомы: резкое расстройство центральной нервной системы (при ценурозе овец), нагнеты.холки (при онхоцеркозе лошадей), конъюнктивиты и кератиты (при телязиозе крупного рогатого скота), кожные кровотечения (при парафиляриозе лошадей). Эти заболевания можно диагностировать с известной долей достоверности на основании клинических наблюдений. При большинстве других гельминтозов такие нехарактерные симптомы, как низкая упитанность и продуктивность взрослых животных, отставание в росте и развитии молодняка, должны служить поводом для проведения гельминтокопрологических и других специальных обследований животных, подозреваемых в заболевании гельминтозами.

Эпизоотологические данные

При диагностике многих гельминтозов сельскохозяйственных животных значительную помощь оказывают эпизоотологические данные (неблагополучие хозяйства по конкретным болезням, сезон года, возраст больных животных, характер пастбищ и водоисточников, метеорологические условия и др.). Например, массовое заболевание с признаками брюшных водянок и падеж овец осенью после дождливого лета и использование под выпасы заболоченных участков пастбищ дает основание заподозрить острую форму фасциолеза. Заболевание гусят летом с признаками расстройства пищеварения (поносы) и нервной системы (парезы) после выпаса их на мелком стоячем водоеме, обильно заселенном циклопами, является основанием для установления предположительного диагноза на дрепанидотениоз. Падеж ягнят весной (через 3—4 недели после начала пастбищного содержания) должен вызвать подозрение о заболевании молодняка овец мониезиозом. Необходимо также учитывать зональные особенности гельминтозов домашних животных, желательно в комплексе с клиническими наблюдениями.

Лабораторно-практшеское занятие 1

МЕТОДЫ ГЕЛЬМИНТОКОПРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИИ

Задание: 1) освоить методику взятия проб фекалий от животных разных видов;

2) ознакомиться с оборудованием и реактивами, употребляемыми для лабораторных методов диагностики гельминтозов;

3) провести исследование фекалий гельминтоовоско-пическими, гельминтоларвоскопическими и гельминто-скопическими методами;

4) научиться отличать яйца гельминтов от посторонних примесей, пузырьков воздуха и т. п.

Оборудование и материалы. Микроскопы, предметные и покровные стекла, металлические петли, стеклянные палочки, пинцеты, стаканчики, бактериологические чашки, кюветы, стеклянные цилиндры или банки, металлические сита, пробирки, смонтированные аппараты Бермана (см. стр. 44); насыщенные растворы поваренной соли, сернокислой магнезии, азотнокислого натрия, гипосульфита натрия, вода; упаковочный материал для фекалий (пакетики из плотной бумаги, спичечные коробки, небольшие баночки и др.); пробы фекалий от овец, свиней, крупного рогатого скота, лошадей, кроликов, кур, гусей и уток.

Место занятия. Лаборатория эпизоотологии и паразитологии.

Методика проведения занятия. Преподаватель кратко объясняет методику взятия фекалий от животных разных видов. Учащиеся по два человека под руководством преподавателя берут пробы фекалий от животных в клинике или учебном хозяйстве техникума. В отдельных случаях накануне занятий лаборанту можно поручать взять фекалии на ферме колхоза или совхоза, неблагополучного по гельминтозам.

В аудитории техникума преподаватель знакомит учащихся с оборудованием и материалами, приготовленными для проведения лабораторных исследований фекалий, кратко излагает методику работы. Объяснения сопровождаются показом наиболее сложных манипуляций, а также демонстрацией таблиц яиц и личинок гельминтов. Затем учащиеся самостоятельно исследуют фекалии наиболее распространенными в гельминтологической практике методами, знакомятся со строением обнаруженных яиц, личинок и фрагментов гельминтов. В тетрадях по лабораторно-практическим занятиям они обязаны вести краткие записи и делать зарисовки наиболее характерных яиц паразитических червей. Схематические рисунки яиц должны быть масштабными.

Йосмертная диагностика гельмйнтозов

Посмертная диагностика гельминтозов осуществляет'' ся при вскрытии трупов и исследовании туш сельскохозяйственных животных и обнаружении гельминтов и характерных патологоанатомических изменении в органах и тканях. Некоторые гельминтозы (аскаридоз, фасцио-лез, днктиокаулез, метастронгилез и др.), возбудителями которых являются крупные гельминты, могут быть диагностированы при патологоанатомическом вскрытии.

Однако многие гельминтозы, вызванные мелкими паразитическими червями, можно шчно диагностировать только путем гельминтологических вскрытий. Различают несколько модификаций гельминтологических вскрытий животных: 1; метод полных гельминтологических вскрытий животных по К. И. Скрябину — предусматривает обследование всех без исключения органов и тканей хозяина с целью обнаружения и сбора всех паразитических червей в имагинальной стадии; 2) метод полных гельминтологических вскрытий отдельных органов по К. И. Скрябину — позволяет установить степень инвази-рованности отдельных органов определенными видами паразитических червей (при диктиокаулезе тщательно исследуют трахею и бронхи, при простогонимозе — яйцевод и фабрициеву сумку птиц и т. д.,); 3) метод неполных гельминтологических вскрытий — обычный иатологоана-томический метод вскрытий, при котором выявляют только наиболее крупных гельминтов (аскарид, моние-зий и т. д.); 4) метод парциальных гельминтологических вскрытий (по Шульцу и Шахназаровой) — предусматривает исследование (макроскопическое или с помощью лупы) только части содержимого органов вместе с гельминтами (матриксов).

Метод полных гельминтологических вскрытий по К. И. Скрябину позвоночных животных проводится с учетом анатомических особенностей у вскрываемых объектов (наличие многокамерного желудка у жвачных, фаб-рициева сумка и воздухоносные мешки у птиц и т. п.). Перед вскрытием тщательно осматривают наружные покровы тела (могут быть членистоногие). Затем снимают кожу (просмотр подкожной клетчатки), вскрывают брюшную и грудную полости, после чего извлекают отдельные системы органов и помещают в соответствующую посуду (тазы, ведра, кюветы). После извлечения внутренних органов осматривают грудную и брюшную полости, собирают отдельно кровь, извлекают головной и спинной мозг, вылущивают глаза, исследуют полости носа и рта (делают соскобы). Тщательно обследуют синовиальные полости суставов и отдельные группь. мышц -(на трихинеллез). После этого приступают к вскрытию отдельных органов методом последовательного промывания («мокрым путем») и компрессорным методом («сухим путем»).

Исследование отдельных органов методом последовательного промывания требует большого количества воды и посуды (ведер, тазов и др.). Этим методом всегда исследуют органы пищеварительного аппарата, печень и легкие сельскохозяйственных животных, взрослых птиц путем многократного промывания водой их полостей с последующим просмотром матриксов поочередно на черном и белом фоне. j

Исследование органов и тканей компрессорным методом применяют реже предыдущего метода. Он заключается в нарастающем раздавливании мелкого органа, или его отдельной части, или соскоба со слизистой оболочки кишечника между компрессорными или другими стеклами до прозрачности. Приготовленный таким образом препарат просматривают под лупой или под малым увеличением микроскопа. Обнаруженных гельминтов осторожно извлекают после разъединения стеклянных пластинок. Используют при гельминтологических вскрытиях цыплят, утят, гусят, моллюсков и других мелких животных. Иногда при вскрытии животных эти методы целесообразно комбинировать.

Органы пищеварения осторожно изолируют и кладут в отдельные кюветы пищевод, желудок (отдельно пред-желудки у жвачных), тонкие кишки, толстые кишки, печень и поджелудочную железу.

После разделения органов приступают к их вскрытию.

Пищевод разрезают ножницами по всей длине, осматривают на наличие опухолей и гельминтов. Затем предметным стеклом или прямым скальпелем делают соскоб со слизистой оболочки и исследуют его между двумя стеклами «сухим способом».

Желудок вскрывают по большой кривизне; содержимое его помещают в цилиндр. Опорожненный желудок смывают водой в этот же сосуд, доливают водой, размешивают деревянной палкой и оставляют в покое на

10—15 минут. Со слизистой желудка берут соскоб и исследуют компрессорным методом. После отстаивания верхний слой жидкости осторожно сливают (чтобы не выбросить паразитов), а сосуд с осадком вновь наполняют водой, размешивают содержимое и опять отстаивают. Периодическое промывание осадка в цилиндре повторяют до просветления жидкости. После очередного сливания жидкости (последнего) осадок просматривают макроскопически и под лупой.

У птиц два желудка: железистый и мышечный. Вскрытый железистый желудок ополаскивают в кювете (для последовательного промывания в дальнейшем). Расправленный желудок рассматривают против источника света. В железах можно обнаружить округлых самок тетрамер красного цвета. На границе мышечного и железистого желудков нередко находят узлы, заключающие в себе нематод (эхинурий). Со стороны серозной оболочки железистого желудка уток иногда обнаруживают утолщения 1 величиной до грецкого ореха, в которых находятся нематоды (гистрихи), у которых головной и хвостовой концы выдвинуты в просвет желудка. Мышечный желудок разрезают ножницами вдоль одной 'из его боковых сторон, развертывают его, ополаскивают в кювете. Содержимое желудка исследуют методом последовательного промывания. Затем отделяют кутикулу от слизистой оболочки, где часто обнаруживают у водоплавающих птиц стрепто-кар и амидостом. Иногда внутреннюю оболочку кути--.кулы исследуют под лупой.

Тонкие и толстые кишки вскрывают отдельно в кюветах с водой. Вначале тонкие кишки освобождают от брыжейки (расправляют) и жира. Затем разрезают по стороне, противоположной прикреплению брыжейки. Содержимое кишечника помещают в один цилиндр, а глубокий соскоб со всей слизистой оболочки — в другой цилиндр и после промывания (до просветления) осадок исследуют макроскопически и под лупой. Таким же образом вскрывают и толстые кишки. У птиц следует вскрывать отдельно 12-перстную кишку от тонких кишок и прямую кишку от слепых кишок с целью обнаружения цестод и трематод некоторых видов, приспособившихся к паразитированию в этих органах.

Печень кладут в эмалированную кювету белого цвета, отделяют желчный пузырь, который помещают в отдельную небольшую посуду, где его разрезают и зали-

Табл I Яйца гельминтов свиней:

/-Ascaris suum; 2 - Me astrongylus elonBatus; ^ Tric^phalus^s; 4 — Oesophagostomum dentatum; 5 — Strongyloides г rhynchus hirudinaceus.

Табл. II. Яйца гельминтов лошадей (/, 2, 3, 4) и крупного рогатого скота (5, 6, 7, 8):

1 — Parascaris equorum; 2 — Drascheia megastoma; 3 — Oxyuris equi; 4 —яйцо стронгилид; 5 — яйцо трихостронгилид; 6 — Neoascaris vitulorum; 7 — яйцо

Paramphistomatidae; 8 — Moniezia benedeni.

Табл. III. Яйца гельминтов овец:

/ — Netnatidorus spathiger; 2 — Fasciola hepatica; 3 — Thysaniezia giardi; 4 — Dicrocoelium lanceatum; 5 — Moniezia expansa; 6 — Haemonchiis conlortus.

Табл. IV. Яйца гельминтов собак-

ЁЙЮТ водой и несколько раз промывают. Печень в сосуде с водой вначале разрезают ножницами по ходу желчных ходов, затем разрывают руками на мелкие кусочки, доливают в сосуд воды. Дальнейшее исследование измельченного содержимого проводят методом последовательного промывания. После этого осадок просматривают.

Поджелудочную железу исследуют методом последовательного промывания после предварительного измельчения руками.

Органы дыхания. Гортань, трахею, бронхи разрезают и осматривают; делают соскобы со слизистой, исследуют компрессорным способом. Паренхиму легких заливают водой, раздробляют на мелкие части и исследуют методом последовательного промывания. Для пораженных участков (осевших на дно) также применяют компрессорный метод.

Половые органы исследуют методом соскоба, последовательного промывания и компрессорно.

Мочевые органы. В почках макроскопически осматривают почечную лоханку (после предварительного разреза), а паренхиму исследуют компрессорным способом под лупой. Мочевой пузырь и мочеточники вскрывают, осматривают; со слизистой оболочки делают глубокий соскоб. Мочу исследуют методом последовательного промывания.

Глаза вскрывают, просматривают внутренние сферы, веки, конъюнктивальный мешок и исследуют методом последовательного промывания.

Мозг (головной и спинной) разрезают на ломтики" и исследуют компрессорным методом под лупой.

Сердце и крупные кровеносные сосуды вскрывают в физиологическом растворе и исследуют методом последовательного промывания, контролируя осадок на черном и белом фоне, с последующим проведением через лупу.

Содержимое брюшной и грудной полостей можно исследовать также методом последовательного промывания.

Сбор, консервирование, этикетирование и пересылка гельминтов

Обнаруженных паразитических червей в органе или его содержимом извлекают препаровальной иглой, кисточкой (крупных паразитов—пинцетом) и переносят в отдельные пробирки с консервирующей жидкостью; нематод сразу помещают в жидкость Барбагалло (3%-ный раствор формалина на физиологическом растворе), а трематод, цестод и скребней вначале помещают в воду, где они погибают, затем прессуют и переносят в пробирки с 70°-ным спиртом. Цистицерков, ценуров, эхинококков консервируют в жидкости Барбагалло. Внутрь каждой пробирки кладут бумажную этикетку, где простым карандашом или тушью отмечают вид и пол животного (от которого собраны гельминты), номер вскрытия (как это записано в журнале вскрытия), орган, где обнаружены гельминты, какие паразиты (Trematoda, Cesto-idea, Nematoda или Acanthocephala) и их число; на обороте этикетки отмечают место, где произведено вскрытие, дату .вскрытия и фамилию вскрывавшего.

Результаты полных и неполных гельминтологических вскрытий регистрируют в специальном журнале.

Собранный, законсервированный и заэтикетирован-ный гельминтологический материал необходимо предохранить от высыхания. Для этого пробирки с гельминтами помещают в банку с притертой пробкой или навинчивающейся пластмассовой крышкой. На дно банки настилают вату, затем устанавливают вертикально два-три яруса пробирок и заливают жидкостью, которая находится в пробирках. Незаполненное пробирками пространство плотно тампонируют ватой. При транспортировке (с нарочным) банку снаружи обкладывают упаковочным материалом (ватой, стружками).

При сборе небольшого количества гельминтов их можно помещать в небольшие флаконы (из-под пенициллина), а также в баночки с навинчивающейся крышкой, которые перед закупоркой заливают консервирующей жидкостью.

Иногда собранный материал посылают в хорошо упакованном виде почтовой посылкой.

Собранные во время гельминтологических вскрытий гельминты определяют до вида после предварительного их просветления и окраски. Просветляют нематод, акан-тоцефал, а также сколексы (головки) цестод в молочной кислоте, 50%-ном глицерине или смеси равных частей молочной кислоты и глицерина, для чег,р готовят временные препараты. Сложнее определять трематод и цестод ввиду необходимости их окраски и приготовления из них постоянных препаратов. Для окраски этих гельминтов предложено значительное число красок и методов. В практических условиях чаще используют квасцовый кармин.

Лабораторно-практическое занятие 2

МЕТОДЫ ПОЛНЫХ ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИХ

ВСКРЫТИИ ТРУПОВ И ОТДЕЛЬНЫХ ОРГАНОВ

ПО К. И. СКРЯБИНУ

Задание: 1) освоить технику полных гельминтологических вскрытий трупов птиц и отдельных органов млекопитающих (легких, кишечников и др.);

2) собрать обнаруженных гельминтов и зафиксировать и» в консервирующих жидкостях;