MedBookAide - путеводитель в мире медицинской литературы
Разделы сайта
Поиск
Контакты
Консультации

Прозоркина H. В., Рубашкина П. А. - Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
<<< НазадСодержаниеДальше >>>

Реакция нейтрализации

Эта реакция основана на том, что антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. В основном эту реакцию используют при вирусных заболеваниях как для определения антител в крови больного, так и для идентификации вирусов. Принцип реакции заключается в том, что исследуемые сыворотки смешивают с вирусосодержащим материалом и выдерживают некоторое время. Затем эту смесь вводят чувствительным лабораторным животным. О результатах этой реакции судят по гибели животных. При отсутствии у животных повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов и токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки.

§ 6. Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней человека

Для профилактики и лечения заболеваний большое значение имеет создание профилактических, диагностических и лечебных препаратов, объединяемых в группу иммуноби ологических препаратов.

По современной классификации А. А. Воробьева имму нологические препараты включают:

* препараты, получаемые из живых или убитых ми организмов (бактерий, вирусов, грибов). К ним от» сятся живые и убитые вакцины, анатоксины, фаги, иммуноглобулины и иммунные сыворотки от иммуни зированных животных и человека;

* иммуномодуляторы для иммунокоррекции, лечения профилактики иммунодефицитов различной этиоло гии;

* диагностические препараты для выявления антигено: и антител, для постановки кожных проб при аллерги ях и иммунопатологических состояниях.

Вакцины

Вакцинации человечество было обязано Э. Дженнер) (см. главу 1). Хотя только открытия Л. Пастера, показа* шего возможность ослабления вирулентности возбудителей, заложили основы современной иммунопрофилактики; Для иммунопрофилактики применяются вакцины несколь^ ких типов.

Убитые вакцины (инактивированные) — получают путоу инактивирования микроорганизмов либо нагреванием, либо действием различных химических агентов (например, формалином). В результате инактивирования микроорганизмы теряют свою жизнеспособность, но при этоа сохраняют антигенные свойства. Для приготовления ких вакцин используются самые разные виды микроор ганизмов, но наибольшее распространение получили бактериальные (например, коклюшная) и вирусные (напр* мер, полиомиелит) вакцины. В качестве антигенов мс гут использоваться как цельные тела микроорганизмов (вакцина чумы), так и отдельные компоненты возбу* телей (например, иммунологически активные фракции вакцины против гепатита В). Если убитые вакцины содержат антиген одного микроорганизма, то такие вакцины называются моновалентными, если антигены двух или нескольких возбудителей — поливакцинами.

Живые вакцины (аттенуированные) — содержат живых микробов, вирулентность которых ослаблена химическими, физическими и биологическими способами. Многие слабовирулентные штаммы получают от больных людей или животных. Живые вакцины имеют большее преимущество перед убитыми, так как они полностью сохраняют антигенный набор возбудителя и обеспечивают более длительное состояние невосприимчивости. Самой известной и длительно применяемой живой бактериальной вакциной является БЦЖ (создана на основе живых микобактерий бычьего типа и предназначена для профилактики туберкулеза). Большую часть живых вакцин, применяемых в практическом здравоохранении, составляют противовирусные вакцины. При введении вакцин в организм у человека вырабатывается иммунитет к тому или иному инфекционному заболеванию. Длительность такого иммунитета различна и зависит от вида возбудителя. Например, при введении вакцины против эпидемического паротита у человека остается очень напряженный иммунитет, такой, как если бы человек переболел этим инфекционным заболеванием. Массовая вакцинация населения во время эпидемических вспышек резко сокращает число заболевших, а также снижает тяжесть течения болезни.

При введении вакцин у человека могут возникать общие и местные реакции. Общая реакция: повышение температуры, головная боль и др. Эти симптомы проходят через 1—3 дня после прививки.

При иммунизации населения очень важно учитывать противопоказания к вакцинации. К ним относятся: лекарственная аллергия, сердечно-сосудистые заболевания, хронические болезни, иммунодефициты, заболевания нервной и дыхательной систем. Перечень противопоказаний изложен в инструкциях, прилагаемых к каждой вакцине.

Прежде чем вакцина будет использована на практике, она должна пройти обязательные доклинические испытания на животных на безвредность, токсичность, аллергенность, им-муногенность. В нашей стране существует система Государственного контроля за качеством иммунобиологических препаратов. Только после оценки по комплексу показателей вакцина решением государственных органов принимается для использования в практике. На каждую ампулу наносятся надписи с указанием названия препарата, его объема, срока годности, номера серии, контрольного номера. В каждую коробку обязательно вкладывается инструкция по применению препарата.

На территории России проводится плановая вакцинация населения, согласно национальному календарю прививок (см. таблицу).

Приказ № 229 от 27.06.2001 г.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ КАЛЕНДАРЬ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРИВИВОК

Возраст

Наименование прививки

Новорожденные (в первые 12 часов жизни)

Первая вакцинация против вирусного гепатита В

Новорожденные (3—7

Вакцинация против туберкулеза

1 месяц

Вторая вакцинация против вирусного гепатита В

3 месяца

Первая вакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита

4,5 месяца

Вторая вакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита

6 месяцев

Третья вакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита. Третья вакцинация против вирусного гепатита В

12 месяцев

Вакцинация против кори, краснухи, эпидемического паротита

18 месяцев

Первая ревакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита

20 месяцев

Вторая ревакцинация против полиомиелита

Ревакцинация против кори, краснухи, эпидемического паротита

Ревакцинация против туберкулеза. Вторая ревакцинация против дифтерии, столбняка

13 лет

Вакцинация против краснухи (девочки). Вакцинация против вирусного гепатита В (ранее не привитые)

14 лет

Третья ревакцинация против дифтерии, столбняка. Третья ревакцинация против полиомиелита

Взрослые

Ревакцинация против дифтерии, столбняка — каждые 10 лет от момента последней ревакцинации

Примечание:

1. Иммунизация в рамках национального календаря проводится вакцинами отечественного и зарубежного производства, зарегистрированными разрешенными к применению в установленном порядке в соответствии с инструкциями по их применению.

2. Детям, родившимся от матерей-носителей вируса гепатита В или больных вирусным гепатитом В в третьем триместре беременности, вакцинация против вирусного гепатита В проводится по схеме 0—1—2—12 месяцев.

3. Вакцинация от гепатита В в 13 лет проводится ранее не привитым по схеме 0—1—6 месяцев.

4. Вакцинация против краснухи проводится девочкам в 13 лет, ранее не привитым или получившим только одну прививку.

5. Ревакцинация туберкулеза проводится неинфицированным мико-бактериями туберкулеза туберкулинотрицательным детям.

6. Ревакцинация против туберкулеза в 14 лет проводится неинфицированным микобактериями туберкулеза туберкулинотрицательным детям, не получившим прививку в 7 лет.

7. Проводимые в рамках национального календаря профилактических прививок вакцины (кроме БЦЖ) можно вводить одновременно разными шприцами в разные участки тела или с интервалом в 1 месяц.

8. При нарушении срока начала прививок последние проводят по схемам, предусмотренным настоящим календарем и инструкциями по применению препаратов.

Анатоксины

Анатоксины — это обезвреженные экзотоксины микроорганизмов. При действии на микробы 0,4% формальдегида, при 40° С в течение месяца токсины переводятся в анатоксины. Впервые способ приготовления анатоксинов был предложен французским ученым Рамоном. Анатоксины получены из экзотоксинов дифтерийного, столбнячного, дизентерийного, ботулинического и стафилококкового микробов, а также из токсинов яда змей и яда растений. При использовании анатоксинов в организме вырабатывается антитоксический иммунитет.

Анатоксины относятся к наиболее эффективным иммунобиологическим препаратам. Введение анатоксинов в организм создает у человека активный искусственный иммунитет.

Поливалентные вакцины могут содержать как бактериальные компоненты, так и анатоксины. Например, АКДС — адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столб-нячная вакцина, которая содержит убитые коклюшные бактерии и анатоксины столбнячного и дифтерийного микробов. Применение комплексных вакцин упрощает схемы вакцинации при проведении массовой иммунопрофилактики.

Иммунные сыворотки

При необходимости быстрого создания иммунитета или для лечения какой-либо инфекционной болезни используют иммунные сыворотки, которые содержат уже готовые антитела. Иммунные сыворотки получают путем вакцинации животных. Иммунные сыворотки можно также получить от вакцинированных или уже переболевших людей. Различают сыворотки антитоксические, которые получают путем иммунизации животных анатоксинами (сыворотки против дифтерии, столбняка, газовой гангрены и др.), и антимикробные, полученные путем многократной иммуни-.

зации бактериями. Сюда относятся сыворотки, содержащие агглютинины, преципитины и другие антитела к возбудителям таких болезней, как брюшной тиф, дизентерия, чума и др.

Противовирусные сыворотки содержат вируснейтрализу-ющие антитела.

При введении человеку иммунных сывороток в организме создается пассивный иммунитет. Продолжительность его невелика, примерно около месяца антитела сохраняются в организме, а затем разрушаются и выводятся. Поэтому такую иммунопрофилактику применяют в случае необходимости немедленного создания иммунитета у людей, контактировавших с больными в инфекционных очагах или при подозрении на возможное инфицирование.

Сывороточные препараты используют также для иммунотерапии инфекционных болезней в сочетании с антибактериальными, антивирусными препаратами.

Диагностические препараты

Это иммунологические препараты, так как действие их основано на иммунологических принципах и реакциях. Диагностические препараты, наборы и системы используют в лабораторной практике для диагностики инфекционных и неинфекционных болезней, идентификации бактерий, вирусов, грибов и простейших, для определения аллергических и иммунопатологических расстройств. Также диагностику мы применяют для выявления специфических антигенов и антител, факторов естественной резистентности (комплемент, интерферон).

В соответствии с целевым назначением диагностические препараты содержат те или иные иммунореагенты, которые используют для выявления объекта исследования. На сегодняшний день созданы сотни диагностических систем, с помощью которых выявляют ВИЧ-инфицированных, больных брюшным тифом и гепатитами, а также онкологических и аллергических больных.

Иммунологические методы диагностики высокочувствительны и достоверны, поэтому нашли широкое применение в медицине.

§ 7. Аллергия. Анафилаксия

Иммунитет — это невосприимчивость макроорганизма к веществам инфекционной и неинфекционной природы. Наряду с состоянием невосприимчивости к тем или иным веществам может возникать и повышенная чувствительность нашего организма к любым чужеродным агентам. Измененную реактивность организма К. Пирке назвал аллергией (от греч. Allos — другой, ergon — действие). Аллергия возникай ет в результате нарушения общих или местных иммунных реакций организма, чаще при повторном поступлении в организм веществ, называемых «аллергенами».

Анафилактическая реакция — является одной из форм измененной реактивности. Анафилаксия впервые изучена; Ш. Рише и П. Портье. Она может проявляться в виде местной (на коже или слизистых оболочках) или системной (ана-1 филактический шок) реакции. Местные реакции могут проявляться в виде сыпи, насморка, бронхиальной астмы. Анафилактические реакции у человека вызываются реагиновы-ми иммуноглобулинами класса Е. Каждый вид животных имеет определенные органы, которые поражаются чаще других (шок-органы). У человека это бронхи, хотя местные анафилактические реакции могут протекать в любом органе. В зависимости от того, где образуется и локализуется комплекс аллерген—антитело, происходит развитие определенной аллергической реакции. Если встреча аллергена с антителом произошла в коже, появляется крапивница; в верхних дыхательных путях — аллергический насморк; в слизистой оболочке глаза — конъюнктивит; в слизистой оболочке бронхов — бронхиальная астма.

Некоторые вещества и препараты способны вызвать анафилаксию: яды пчел, ос, змей; пыльца многих растений (амброзия); антибиотики (пенициллин); сыворотки (противодифтерийная, противостолбнячная); вакцины (противогриппозная) и пр.

Первую дозу антигена, вызывающего повышенную чувствительность, называют сенсибилизирующей, вторую, от введения которой развивается анафилаксия, — разрежающей.

У человека анафилактический шок возникает вследствие повторных введений тех или иных антигенов. Анафилактический шок характеризуется расстройством деятельности сердечно-сосудистой системы (падение АД), спазмом гладкой мускулатуры (судороги), снижением температуры тела на 1—4 градуса, болью в суставах и т. д.

Аллергические реакции и анафилаксия — это очень сложные процессы, присущие только высокоорганизованным организмам, обладающим свойством реактивности.

Для профилактики анафилаксии предварительно ставят внутрикожную пробу путем введения в предплечье 0,1 мл ыворотки, разведенной 1 : 100. При отрицательной реакции папула не более 0,9 см в диаметре и краснота вокруг нее ограниченная) через 20—30 минут вводят 0,1—0,5 мл неразведенной сыворотки, а через 30—60 минут — всю дозу. Если внутрикожная проба положительная (диаметр папулы более 1 см и большая зона покраснения), разведенную сыворотку 1 : 100 впрыскивают подкожно в дозах 0,5; 1,2 и 5 мл с интервалами в 20 минут, затем 0,1—0,2 мл неразведенной сыворотки с интервалами в 30 минут. Этот метод десенсибилизации путем дробного введения антигена сыворотки был предложен А. М. Безредка.

В качестве лечебных средств при анафилактическом шоке применяют кордиамин, адреналин, супрастин и другие ан-

5. Зак 361 тигистаминные препараты; при пенициллиновом шоке — ту же антишоковую терапию и пенициллиназу.

§ 8. Практическая часть

Постановка реакции агглютинации на стекле и в пробирках

Во всех иммунологических реакциях основным компонентом является антиген, который обладает двумя свойствами:

1) способностью вызывать иммунологический процесс в организме;

2) способностью соединяться с антителами в серологических реакциях.

Реакции взаимодействия антитела с антигеном называются серологическими (от лат. serum — сыворотка). Серологические реакции используют:

1) для обнаружения в сыворотке крови антител к тому или иному микробу с помощью известного специфического антигена;

2) для установления вида или типа выделенного микроба по его антигенной структуре с помощью диагностической сыворотки, содержащей известные специфические антитела.

Посуда и аппаратура для постановки серологических реакций

Посуда:

1) пробирки химические и центрифужные;

2) колбы Эрленмейера и плоскодонные;

3) пипетки пастеровские объемом 10 и 5 мл с делениями на 0,1 мл;

4) градуированные цилиндры.

Посуда должна быть чистой и сухой. Для ее обработки нельзя применять дезинфицирующие средства (карболовая кислота, хлорамин), кислоты и щелочи. Посуду кипятят в простой воде. Стерилизовать серологическую посуду не обязательно.

Аппаратура:

1. Штативы с гнездами.

2. Термостат и водяная баня с терморегуляторами.

3. Центрифуга на 2000—3000 обмин.

4. Агглютиноскоп.

Реакция агглютинации (РА)

Агглютинацией называется обнаруживаемое невооруженным глазом склеивание и вьшадение в осадок микробных тел при взаимодействии их со специфическими антителами.

РА получила большое распространение в микробиологической практике для диагноза:

1) брюшного тифа;

2) паратифов А и Б (реакция Видаля);

3) сыпного тифа;

4) бруцеллеза (реакция Райта);

5) туляремия и др.

Постановка развернутой реакции агглютинации объемным способом Для постановки реакции требуется:

1) сыворотка крови, подлежащая исследованию, 0,1—0,2 мл;

2) физиологический раствор;

3) корпускулярный антиген: взвесь живой 20-часовой культуры микробов.

Используются культуры только в S-форме (гладкие, блестящие колонии с ровными краями).

Приготовление разведений сыворотки больного:

Из сыворотки готовят ряд последовательных разведений, от 1:50— 1:100 до 1:1600— 1:3200. В отдельной пробирке готовят первое разведение сыворотки 1:50 или 1:100. Для этого градуированной пипеткой набирают 0,1 мл сыворотки, другой пипеткой прибавляют к ней 4,9мл (1:50) или 9,9 мл (1:100) физиологического раствора. Основной раствор сыворотки используется для приготовления последовательных, двукратных разведений. По окончании разведений во все пробирки ряда (кроме контрольной) прибавляют по 2—3 капли антигена. Пробирки встряхивают и ставят на 2 часа в термостат при температуре 37 °С. Затем учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат реакции агглютинации регистрируют через 18—20 часов стояния пробирок при комнатной температуре.

Положительный результат реакции агглютинации характеризуется образованием на дне пробирки осадка с выраженным просветлением надосадочной жидкости.

Осадок на дне пробирки, образовавшийся в результате склеивания микробных тел, называется агглютинатом.

Для регистрации результатов реакции агглютинации пользуются четырехкрестовой системой обозначения: + + + н— полная агглютинация, при которой большой осадок на дне располагается кучкой или в форме открытого перевернутого зонтика. Надосадочная жидкость прозрачная; + + + — почти полная агглютинация, осадок такой же, надосадочная жидкость почти прозрачная; + + — слабая агглютинация, осадок едва заметен, жидкость непрозрачная; + — отмечаются следы агглютинации;

— отрицательная реакция, содержимое пробирки равномерно мутное.

Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считают ее титром.

Постановка реакции агглютинации на стекле

Эта реакция считается ориентировочной. Ею часто пользуются для определения вида микроба.

1. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят с помощью пастеровской пипетки 2 капли агглютинирующей сыворотки.

2. В сыворотку вносят исследуемую бактериальную культуру, снятую с поверхности плотной питательной среды.

3. Внесенную культуру тщательно перемешивают. Реакция протекает при комнатной температуре. Результат учитывают с помощью лупы через 5—10 мин.

При положительной реакция в капле отмечается окучивание бактерий в виде зернышек или хлопьев.

Факторы естественной резистентности организма. Методы их изучения. Фагоцитоз

У человека и высших животных фагоцитарной способностью обладают клетки ретикуло-эндотелиальной системы: лейкоциты крови и лимфы, фиксированные купферовские клетки печени, ретикулярные клетки селезенки, костного мозга, лимфатических узлов, гистиоциты рыхлой соединительной ткани.

В борьбе с патогенными микробами большую роль играют лейкоциты. Судьба микроорганизмов, захваченных лейкоцитами, может иметь три исхода:

<<< НазадСодержаниеДальше >>>

medbookaide.ru